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理化检测法是原创利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，常用的抗生有：气相色谱法、高效液相色谱法、素残联用技术等，留的理化能进行定性定量和药剂鉴定，检测检测敏感性较高。法法
一、原创理化检测法--气相色谱法（GC）：气相色谱法是抗生以气体作为流动相，被测样品由载气带入色谱柱，素残以吸附色谱或分配色谱使不同组分分离，留的理化按顺序从色谱柱流出。检测检测再经过检测器将组分信号转换并记录，法法达到定性定量分析。原创其样品前处理包括提取、抗生甲基化和净化3个步骤，素残采用进样口升温的方式，可以提高测定的灵敏度。该方法与质谱技术结合，可以对青霉素类、氨基糖苷类、四环素类等抗生素进行定性定量分析。
二、理化检测法--高效液相色谱法（HPLC）：HPLC引用了GC理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤进行残留药物的分离和检测，由于HPLC不需高温条件，故适于易受热分解，不易气化的残留成分分析。HPLC是国内药物残留检测应用最普遍、最有效的分析方法，其特点是灵敏度高、检测限低、方法稳定。由于氨基糖苷类和大环内酯类抗生素均无紫外吸收，故一般采用离子交换色谱来测定这类抗菌药物。但是对于绝大多数抗生素多采用反相色谱法，其中最常用的检测方法就是紫外检测器和荧光检测器。
三、理化检测法--联用技术：联用技术包括GC－MS、LC－MS 和毛细管区带电泳－质谱联用法(CZE－MS) 等。实现了高效层析分离和检测联机，可用微电脑控制层析条件、程序和数据处理，其特异性、灵敏度和重复性均好，并可一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物检测。联用技术的检出限要低于HPLC方法。因此，联用技术在食品残留药物检测中的应用越来越广泛。
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